一文读懂结直肠癌检测新靶标微卫星不稳定 [复制链接]

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研究表明，结直肠癌(CRC)是多种癌基因突变或抑癌基因失活累积导致基因组不稳定的结果，目前基因组不稳定主要有以DNA微卫星重复序列长度改变为特征的微卫星不稳定（MSI）和整个或部分染色体变异为特征的染色体不稳定（CIN）两种途径。

结直肠癌遗传学研究显示约15%的原发性结直肠癌系MSI所致，其中约20%（总体结直肠癌的2%~4%）是林奇综合征（Lynch综合征），这意味每35例结直肠癌患者中就有1例林奇综合征患者。MSI在大部分林奇综合征和大约15%散发性结直肠的发病机制中起到了决定性的作用。

而且国内外有学者提出微卫星不稳定（MSI）状态可能是影响结直肠癌患者预后的因素，同时提出微卫星不稳定结直肠癌患者存在较为特殊的临床病理特征。

那么到底什么是微卫星不稳定（MSI）呢？它又是如何形成的呢？

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微卫星不稳定（MSI）简介

首先我们先了解一下什么是微卫星？微卫星又被称为短串联重复，是一种短而重复且长度10个核苷酸的DNA序列，一般由1~6个核苷酸串联并且重复排列组成。

微卫星不稳定（MSI）指由于基因复制时因重复序列的插入或缺失突变导致微卫星片段长度改变的现象。

图片来源：摄图网

微卫星不稳定（MSI）的发生主要由于错配修复系统（MMR）缺陷引起的，很多生长调控相关因子的基因中含有大量微卫星，在复制过程中易于出现错误，因此非常依赖MMR系统修复。

与结直肠癌相关的系统成员包括MLH1、MSH2、MSH6和PMS2，也是肠癌基因检测包括的四个检测项。（想知道更多可戳蓝字前文→结直肠癌术后基因检测，真的不是想骗我的钱吗？）

图片来源：《生物化学与分子生物学》人卫第九版

如MMR系统缺陷，则微卫星复制错误无法被修复，造成微卫星不稳定，引起肿瘤相关基因出现异常，进而诱导肿瘤的发生。

MSI在结直肠癌的发病机制中发挥着重要的作用，那么在临床上如何检测MSI呢？其判读标准又是如何？

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在临床上MSI的检测方法及其判读标准

MSI检测方法主要是PCR技术和免疫组织化学IHC技术。

PCR技术

PCR技术是通过在肿瘤组织样本中扩增DNA的几个微卫星位点，然后与对应的正常DNA进行比较。

图片来源：摄图网

美国国家癌症研究所推荐对5个微卫星标志物进行检测以确定MSI状态，其中包括两个单核苷酸重复位点BAT-25和BAT-26以及3个多核苷酸重复位点D2S、D5S和D17S。

除此之外，也有文献推荐了其他检测位点，比如Promega标准中包括5个单核苷酸重复位点BAT-25、BAT-26、MONO-27、NR-21和NR-24以及两个多核苷酸重复位点PENTA-C和PENTA-D。

根据PCR法检测结果，结直肠癌可分为3类：

1）如≥30%的重复位点显示MSI，则为MSI高的结直肠癌；

2）如＜30%的重复位点显示MSI，则为MSI低的结直肠癌；

3）如没有重复位点显示MSI，则为微卫星稳定型（MSS）的结直肠癌。

IHC技术

IHC法被广泛用于鉴定一个或多个错配修复蛋白（MLH1、MSH2、MSH6和PMS2）的缺失。

这些错配修复蛋白通常在正常组织中表达，而在错配修复蛋白缺失的结直肠癌中则呈缺乏特异性染色，等同于MSI高的结直肠癌，而错配修复蛋白表达完整的结直肠癌则为MSS或MSI低的结直肠癌。

IHC法检测结果最常见的是MSH2和MSH6染色正常，而MLH1和PMS2同时缺失，表明患者可能是Lynch综合征相关的结直肠癌或错配修复蛋白缺失的散发性结直肠癌，需进一步检测BRAFVE突变和MLH1启动子CpG岛超甲基化来予以区分。

其他错配修复蛋白缺失，如MSH2、MSH6同时缺失或MSH6、PMS2的孤立缺失，极有可能是因基因生殖系突变导致的Lynch综合征，可对患者的血白细胞DNA或正常组织进行生殖系突变分析来予以明确。

在临床上常常协同使用PCR技术和IHC技术检测，这样可以检查出用单一方法检测时可能漏掉的错配修复缺陷的结直肠癌。

了解了MSI的检测方法，那么MSI检测有哪些临床意义呢？

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MSI检测的临床意义

1.参与林奇综合征的筛查及诊断

林奇综合征的诊断主要基于MMR基因的胚系突变，最新一项研究表明简化的临床标准

满足其一即可：

小于50岁的结直肠癌患者；

具有结直肠癌或子宫内膜癌病史；

直系亲属具有结直肠癌或子宫内膜病史。

加常规免疫组化检测及MSI检查初筛，再行BRAFVE突变及胚系基因突变检测确诊，能极大地提高林奇综合征的预测检出率。

2.MSI状态用于结直肠癌治疗效果预测

与MSS的结直肠癌相比，MSI高的结直肠癌（包括散发性和Lynch综合征相关的结直肠癌）患者的临床表现较差，但预后更好。

3.MSI状态用于结直肠癌治疗效果预测

氟尿嘧啶常用于Ⅱ期结直肠癌患者的化疗，根据研究分析得出，MSS患者可自氟尿嘧啶辅助化疗中获益，而MSI高的患者的生存结局尚未显示有统计学意义。

此外，有研究发现氟尿嘧啶用于MSI高的Ⅱ期结直肠癌患者的辅助化疗无益，提示可能与患者的错配修复缺陷相关。

但是对手术后Ⅲ期结直肠癌患者，不论他们的MSI状态如何，接受由氟尿嘧啶、亚叶酸和奥沙利铂组成的标准辅助化疗方案治疗均有益。

4.MSI状态与免疫治疗

最近的研究表明，MSI高的转移性结直肠癌对免疫检查点抑制剂治疗的响应良好。MSI高的肿瘤含有的丰富的新抗原可诱发免疫反应。

同时，由于MSI高的肿瘤自身的不稳定性和超突变性，检查点蛋白常常在此类肿瘤中高表达，通过对检查点蛋白的靶向抑制，检查点抑制剂可再次活化T细胞，促使机体免疫系统攻击和杀灭肿瘤细胞，根据临床研究结果显示，免疫治疗对MSI高的结直肠癌的疗效和耐受性均良好。

总而言之

MSI高的结直肠癌的筛查在临床上具有重要意义，不仅能够预测患者的预后，而且还可以指导患者的治疗，所以建议结直肠癌患者都能够进行MSI的检测，从而更好的了解病情，尽早得到有效治疗。